1.離體培養的細胞生命力比較脆弱，因此傳代時細胞沒有生長到培養瓶底壁面積的 80%以前，不要急于傳代。
2.傳代，由于原代培養中各種類型的細胞常混雜生長，傳代時不同細胞又不同的消化時間，因而要根據需要注意及時處理。
3.對貼壁細胞消化后的吹打過程要有序進行，要從一邊開始到另一邊結束，尤其是器皿的四角處， 確保瓶皿底壁各處的細胞都被吹打脫離。 吹打時動作不宜過猛， 吹出液體的力度要適中，否則會直接損傷細胞并產生能傷害細胞的氣泡。
4.對于貼壁能力較弱，容易脫壁的細胞，可以不經蛋白酶原消化處理和終止消化這兩步，直接對原代培養物或經漂洗后用吸管進行吹打使細胞脫離瓶皿底壁。 這種直接吹大的方法對生命力旺盛的細胞如某些腫瘤細胞較為合適。 高強度機械吹打易對細胞造成傷害較大， 細胞也常有較大數量的丟失， 因而絕大部分貼壁生長的細胞需消化后才能吹打， 一般不單獨采用高強度機械吹打。
5.首次傳代時適當增大接種的細胞密度，使培養的細胞間盡快發生相互作用，有利于傳代細胞的存活。
6.傳代數是指對培養物傳代的次數，它不等于細胞分裂的次數或細胞的代數，而僅代表傳代操作的次數。
7.傳代對細胞的影響或傷害程度僅次于將活細胞從生物體內取出并進行原代培養的程度。只是因為傳代后的細胞生長并不像剛開始原代培養時那樣緩慢罷了。
8.每經過一次傳代，細胞的生長環境就相應發生一次較大變化。體外生長的細胞若處于動蕩的生活環境中， 細胞的遺傳特性往往容易發生改變。 經過多次傳代培養的細胞， 往往容易轉化為惡性細胞。 因此， 傳代對細胞生長和性狀會產生不利影響， 一般情況下要盡可能減少傳代次數。
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