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小鼠elisa檢測試劑盒?操作步驟

  本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上,實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中指標(biāo)的濃度。

  
  白脂素(Asprosin)是哺乳動物(白色脂肪)組織中產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)激素,可刺激肝臟將葡萄糖釋放到血液中。白脂素由基因FBN1編碼,作為原纖維蛋白原的一部分,并通過異性蛋白水解作用從原纖維蛋白的C末端釋放。在肝臟中,白脂素通過環(huán)狀單磷酸腺苷(cAMP)依賴性途徑激活葡萄糖的快速釋放。
  
  飯后,肝臟在胰島素的作用下以糖原的形式儲存過量的葡萄糖。在兩餐之間(或禁食期間),刺激肝臟分解糖原以釋放葡萄糖(糖原分解),并合成新的葡萄糖(糖異生)。然后葡萄糖被釋放到血液中,以維持大腦和其他器官的正常功能。糖原分解和糖異生是由胰高血糖素等激素激活肝細(xì)胞中的環(huán)磷酸腺苷(AMP)通路,該cAMP促進(jìn)代謝酶的激活,導(dǎo)致葡萄糖的產(chǎn)生和釋放。
  
  有研究發(fā)現(xiàn),表現(xiàn)出胰島素抵抗和肥胖的患者血清中的Asprosin水平升高。接受減肥手術(shù)的肥胖患者手術(shù)后血清中的Asprosin水平下降。在對動物進(jìn)行的藥物性的Asprosin消耗實驗中,初步結(jié)果提出了Asprosin用于治療II型糖尿病和肥胖癥的可能性。例如,Chopra及其同事觀察到,將針對Asprosin的抗體注射到糖尿病小鼠體內(nèi)時,血糖和胰島素水平得到了改善。有報道稱Asprosin能穿過血腦屏障,調(diào)節(jié)控制饑餓感和飽腹感的下丘腦中的神經(jīng)元,抑制肥胖小鼠中的Asprosin會減少進(jìn)食并導(dǎo)致體重減輕。
  
  小鼠elisa檢測試劑盒操作步驟
  
  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。
  
  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  
  3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。
  
  4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
  
  5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  
  6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  
  7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  
  8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  
  9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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