ELISA是最經(jīng)典的一種免疫學實驗操作，中文名字叫酶聯(lián)免疫吸附實驗。其原理就是利用抗體能和對應的抗原蛋白分子特異結(jié)合，同時通過抗體上的酶聯(lián)標記與底物反應顯色或被激發(fā)而發(fā)光，最終間接完成抗原抗體復合物的觀察、檢測與定量。

圖1 為elisa原理

  其實elisa和westernblot很像，不同的是后者的待測物也就是蛋白質(zhì)，通常是在細胞內(nèi)，因此需要提取蛋白質(zhì)才能進一步分離和檢測；而elisa的待檢測物通常已經(jīng)從細胞內(nèi)分泌出來到培養(yǎng)液中，因此他的前處理步驟更簡單。

圖2 比色法蛋白質(zhì)印跡檢測示意圖

  幾種不同的elisa方法對比

  ELISA根據(jù)檢測方法分為好幾類，分別是直接法、間接法和夾心法。

  直接法就是待檢測抗原黏附在微孔板的孔內(nèi)，然后使用帶酶標的一抗與抗原結(jié)合，對吼加入底物進行顯色，并檢測吸光度，由于吸光度的大小與抗原抗體復合物的數(shù)量成一定的線性關(guān)系，也就間接的實現(xiàn)了測定抗原數(shù)量的目標。

  間接法和直接法的區(qū)別在于兩種抗體代替一種抗體，結(jié)合抗原的抗體（一抗）不帶酶標記物，當抗原抗體結(jié)合后再使用酶標記的二抗結(jié)合一抗加入底物顯色并檢測。

  在間接法的基礎上，又再發(fā)展出更為復雜的夾心法，它在微孔板底部預先包被一種捕獲抗體，用于結(jié)合抗原，在這個復合物的基礎上再結(jié)合一抗、二抗并檢測。

  上述三種方法各有特點，目前來看夾心法的ELISA應用最普遍，下面這個表格總結(jié)不同方法特點：

  接下來，我們繼續(xù)了解幾種比較特別的ELISA實驗法，首先是競爭法。如果待測抗原特別小，無法同時結(jié)合

  捕獲抗體和一抗的話，就不適合用夾心法檢測，此時可以在微孔板孔內(nèi)包被抗體，同時提供帶標記的同種抗原，把待測抗原和標記抗原一起加入和抗體結(jié)合，由于兩者會競爭結(jié)合抗體，所以最終檢測的信號越高，證明待檢測抗原越少，反之則越多。

  另一種比較特別的是叫elispot,用于檢測細胞分泌出來的蛋白和細胞因子。預先在孔內(nèi)包被捕獲抗體，加入未處理/預先處理的細胞，當細胞分泌出特定蛋白或細胞因子時，就會被抗體捕獲。細胞裂解后孔內(nèi)只剩下細胞因子與捕獲抗體的復合物，此時再加入能結(jié)合的細胞因子的帶生物素標記的抗體。最終通過顯色形成的斑點來計算分泌蛋白的數(shù)量。

圖3 為elispot實驗示意圖

  最后一種就是in-cellelise。這種檢測在細胞培養(yǎng)板內(nèi)進行，細胞是正常生長的，在孔內(nèi)加入一抗結(jié)合細胞表面的特異蛋白，然后通過酶標二抗結(jié)合一抗后進行觀察。二抗可以是熒光標記也可以是酶聯(lián)標記