酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是一種標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。這種技術(shù)是使用最廣泛的技術(shù)，也是一種快速簡(jiǎn)單技術(shù)，它是利于抗原與抗體特異性結(jié)合進(jìn)行定性和定量分析。ELISA實(shí)驗(yàn)是最靈敏的免疫分析方法之一，廣泛應(yīng)用各種研究和行業(yè)，包括環(huán)境、食品安全、制藥和疾病標(biāo)志物診斷。
目錄
一、ELISA基本原理
在ELISA實(shí)驗(yàn)中，目標(biāo)分子（抗原或抗體）被固定在酶標(biāo)板（96孔）上，然后加入含有酶標(biāo)記抗體或抗原溶液，如果樣本中含有目標(biāo)分子，它們將與固定在酶標(biāo)板上抗體或抗原特異性結(jié)合。最后，加入酶底物，在酶的催化下，底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)色有色產(chǎn)物，顏色的深淺與目標(biāo)分子的量呈正相關(guān)。最后，通過(guò)檢測(cè)儀器對(duì)顏色進(jìn)行定量分析，既可得目標(biāo)分子的含量。
二、ELISA操作流程
ELISA操作流程基本包括包被、加樣、洗滌、酶標(biāo)記、洗滌、底物顯色和檢測(cè)等，下面為大家詳細(xì)介紹：
包被。包被是ELISA第一步，將抗原或抗體以適當(dāng)濃度（通常在1-10µg/mL）稀釋后，加到固相載體（如96微孔板）中。在4℃過(guò)夜或在室溫下孵育1-2個(gè)小時(shí)，使其結(jié)合。孵育后，用洗滌緩沖液（如PBS或TBST）洗滌3次，去除未結(jié)合的成分。
加樣。將待檢測(cè)樣本（可根據(jù)需要稀釋）加入固相載體中。在適宜的條件下（如37℃孵育一小時(shí)）使樣本中的目標(biāo)分子與固相載體上抗原或抗體結(jié)合。
洗滌。使用洗滌緩沖液洗滌3-5次，以去除未結(jié)合的成份，減少背景干擾。
酶標(biāo)記。加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，通常稀釋度為1：1000至1:5000。在37℃孵育一小時(shí)，使其與結(jié)合目標(biāo)分子形成穩(wěn)定復(fù)合物。
洗滌。再次使用洗滌緩沖液洗滌3-5次，去除未結(jié)合的成分。
底物顯色。加入適量的酶底物（如TMB或OPD），并在適宜的條件下（如室溫孵育15-30分鐘）進(jìn)行反應(yīng)。監(jiān)測(cè)反應(yīng)的顯色，直到達(dá)到所需顏色深度。
檢測(cè)。使用酶標(biāo)儀在適度波長(zhǎng)（如450nm）下測(cè)定顯色產(chǎn)物的吸光度，進(jìn)行定量分析得出目標(biāo)分子含量。
ELISA應(yīng)用領(lǐng)域
ELISA應(yīng)用領(lǐng)域較為廣泛，在生物學(xué)研究中，ELISA可以用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、激素等活性物質(zhì)，了解其在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等過(guò)程作用。
在醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，ELISA技術(shù)廣泛應(yīng)用各種傳染病、腫瘤、自身免疫性疾病診斷和檢測(cè)。例如乙肝病毒、艾滋病病毒、腫瘤標(biāo)志物等均可通過(guò)ELISA進(jìn)行檢測(cè)。
在食品安全領(lǐng)域，ELISA技術(shù)可以檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、毒素等的檢測(cè)，保障食品安全等。
環(huán)境檢測(cè)領(lǐng)域，ELISA技術(shù)可以檢測(cè)水體、土壤等環(huán)境樣品中的有害物質(zhì)，如重金屬、有機(jī)污染物等，為環(huán)境保護(hù)提供支持！
ELISA注意事項(xiàng)
在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，了解ELISA注意事項(xiàng)可以在實(shí)驗(yàn)中少走彎路。下面是紀(jì)寧生物為大家總結(jié)一些實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1、如果是ELISA，可以在一周內(nèi)采集并檢測(cè)樣品，并保存在2-8°C。如果未及時(shí)完成檢測(cè)，請(qǐng)將樣品分割并冷凍在-20°C或-80°C，以避免重復(fù)凍融。
2、ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍與樣品中分析物的濃度范圍不一樣。建議在實(shí)驗(yàn)前根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)估算模型中分析物的濃度，并通過(guò)初步實(shí)驗(yàn)確定選擇。
3、應(yīng)仔細(xì)收集ELISA血清樣品，以避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解會(huì)釋放具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，并且溶血的發(fā)作可能會(huì)增加非特異性顯色。
4、如果存在細(xì)菌污染，標(biāo)本必須新鮮檢測(cè)。細(xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。如果在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可能會(huì)發(fā)生聚合反應(yīng)，間接法ELISA會(huì)在背景下加深。
5、ELISA樣品處理實(shí)驗(yàn)中，如果樣品反復(fù)凍融，蛋白效價(jià)會(huì)降低，因此建議多次冷凍少量待測(cè)樣品。
上述是紀(jì)寧為大家介紹ELISA原理，通過(guò)對(duì)原理認(rèn)識(shí)有助于了解認(rèn)識(shí)ELISA實(shí)驗(yàn)流程。如果您對(duì)原理還有疑問(wèn)，歡迎私信。上海紀(jì)寧是一家專注于生物、生化領(lǐng)域產(chǎn)品銷售，主要經(jīng)營(yíng)的有ELISA試劑盒、生化試劑、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、細(xì)胞、血清、培養(yǎng)基等生化科研試劑產(chǎn)品。
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