細胞復蘇是生命科學和醫學領域的關鍵程序。確保溫和地解凍冷凍細胞對于保持其活力和功能至關重要。細胞復蘇是細胞培養第一步，因此這一步是非常關鍵的。了解細胞復蘇及步驟對于后續細胞培養比較關鍵，今天，為大家介紹一下細胞培養之細胞復蘇。

    細胞復蘇的原理

    細胞復蘇是指將凍存在液氮或者零下七十度冰箱中的細胞解凍后重新培養，使解凍后細胞重新恢復其生物活性和功能的過程，包括恢復正常的形態、貼壁、生長和增殖等。在細胞復蘇過程，要遵循原則是“慢凍快溶。”其目的是防止細胞解凍過程水份進入細胞、形成冰晶而影響細胞存活。

    細胞復蘇步驟

    從液氮罐取出凍存管，應立即放入三十七度水浴鍋中，不時輕柔搖動，使其1-2分鐘內極速融化。注意在凍存管放入水浴鍋中水位應該低于凍存管的蓋子， 避免水進入凍存管造成污染。

    待完全融化后，凍存管取出用百分之七十五的酒精擦拭冷凍管外殺菌后，待酒精恢發，打開蓋子取出凍存管細胞懸浮液，緩慢滴加到有培養液的T25或者是T75的培養瓶中，如果細胞數量較少，建議先用T25培養瓶，待細胞生長至一定密度后再傳代至T75培養瓶，這樣可以提供更適宜的生長環境。在37℃、5%CO培養。如果細胞在凍存中用到細胞凍存液，凍存液含有DMSO，DMSO對細胞有一定毒性，建議在細胞復蘇后進行一次低速離心（例如1000rpm，5分鐘），去除含有DMSO的凍存液，再用新鮮培養基重懸細胞，可以減少DMSO對細胞的損傷，提高細胞活力。

    用培養液稀釋適當稀釋后，將重懸的細胞接種到培養皿或者T25或者是T75的培養瓶中，37℃、5%CO培養，二十四小時后，更換新鮮培養基，去除死細胞，三天進行更換一次，當細胞長到有80-90%匯合進行傳代。

    細胞復蘇過程注意事項

    1）在取凍存細胞時應做好個人防護工作，戴好手套和護目鏡。由于解凍時凍存管的溫度急劇上升，將可能會發生破裂和泄露。因此為了避免凍存管安全問題，給大家總結如下建議：

    1.選擇高質量的凍存管:選擇正規廠家生產的、質量可靠的凍存管，確保其能夠承受溫度的劇烈變化。

    2.檢查凍存管密封性:在使用前，仔細檢查凍存管是否有裂縫或破損，確保其密封性良好。

    3.使用專用凍存盒:使用帶有透氣孔的專用凍存盒來保存和取出凍存管，可以減少液氮進入管內的風險。

    4.快速解凍，但避免溫度驟變:將凍存管從液氮中取出后，要盡快放入37度水浴鍋中解凍，但要避免將凍存管直接扔進水浴鍋，可以先用手握住凍存管幾秒鐘，使其稍微回溫，然后再放入水中。

    5.水浴時，水位低于蓋子:水浴過程中，要確保水位低于凍存管的蓋子，避免水進入管內。

    6.戴防護裝備:進行細胞復蘇操作時，要佩戴防護眼鏡和手套，以防萬一發生意外。

   2） 細胞放入水浴鍋中復蘇時，用鑷子夾住細胞凍存管，并在水浴中輕柔的搖動，使其受熱均勻，且速度越快越好，這樣可以最大限度的保存細胞活力，并防止水浴鍋中的水進入細胞凍存管造成細胞污染。

    3）打開細胞凍存管之前需用酒精棉球將凍存管消毒后并晾干，細胞復蘇后，我盡快恢復到正常的生理狀態，所以應該盡快將其轉移到37℃的培養箱中。

    4）解凍時間在1-2分鐘完成，整個過程盡量避免吹打細胞，導致細胞復蘇后生長狀態不佳。細胞懸浮 可以用輕輕搖晃或者傾斜混勻的方式代替。

    5）細胞復蘇過程盡量避免凍存管沾水，防止支原體污染，實驗室定期用過氧化氫熏蒸，細胞小黑點增多時用支原體檢測試劑盒檢測，并且及時清除。