紀寧生物亞硝酸還原酶(NiR)測試盒測定意義介紹如下：
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注 意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
硝酸還原酶（NiR）是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶，廣泛存在于微生物及植物體內，是自然界氮循環過程中的關鍵酶，可以將亞硝酸鹽降解為 NO 或 NH3，從而減少環境中亞硝態氮的積累，降低因亞硝酸鹽累積而造成的對生物體的毒害作用。
測定原理：
亞硝酸還原酶可將 NO2—還原為 NO，使樣品中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的 NO2—減少，即 540nm處吸光值的變化可反映亞硝酸還原酶的活性。
需自備的儀器和用品：天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、水浴鍋、低溫離心機。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 112mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 5mL 蒸餾水溶解。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。（如出現沉淀可以 70-80℃加熱溶解）
試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出現沉淀可以 70-80℃加熱溶解）
試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：臨用前根據用量將試劑四和試劑五以 1:1 的比例混合。
酶液提?。?
1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2．細菌、真菌：按照細胞數量（10?個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置于冰上待測。
測定操作表：
空白管 對照管 測定管
樣本（μL） 20 20
蒸餾水（μL） 20 40
試劑一（μL） 40 40
試劑二（μL） 40 40 40
混勻后，25℃反應 1h
試劑三（μL） 40 40 40
充分震蕩 30S
上清液（μL）70 70 70
工作液（μL）140 140 140
充分混勻，，靜置 3min 后測定各管 540nm 處吸光值，分別記為 A 空白管、A 對照管、A 測定管?？瞻坠苤灰鲆还?，每個測定管需設一個對照管。
計算公式：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.3594x + 0.0072，R2 = 0.9997；x為標準品濃度（μmol/mL），y 為吸光值（A 標準管-A 空白管）。
1．按照蛋白含量計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每小時還原 1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h /mg prot）= [A 空白管-(A測定管-A 對照管)-0.0072]÷1.3594×V 標÷（V 樣×Cpr）÷T = 1.47×（A 空白管-A 測定管+A 對照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照樣本質量計算
酶活單位定義：每克組織每小時還原 1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h/g 鮮重）=[A 空白管-(A 測定管-A 對照管)-0.0072]÷1.3594×V 標÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T =1.47×（A 空白管-A 測定管+A 對照管-0.0072）÷W
3. 按照細胞數量計算
酶活單位定義：每 10?個細胞每小時還原 1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。NiR（μmol/h /10?cell）= [A 空白管-(A 測定管-A 對照管)-0.0072]÷1.3594×V 標÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）÷T = 1.47×（A 空白管-A 測定管+A 對照管-0.0072）÷細胞數量V 標：標準液體積，0.04mL；V 樣：體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：
反應時間，1h； Cpr：樣本蛋白含量；W：樣本質量，g
b. 使用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.6797x + 0.0072，R2 = 0.9997；x 為標準品濃度（μmol/mL），y 為吸光值（A 標準管-A 空白
管）。
1．按照蛋白含量計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每小時還原 1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。NiR（μmol/h /mg prot）= [A 空白管-(A 測定管-A 對照管)-0.0072]÷0.6797×V 標÷（V 樣×Cpr）÷T = 2.94×（A 空白管-A 測定管+A對照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照樣本質量計算
酶活單位定義：每克組織每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。NiR（μmol/h/g 鮮重）=[A 空白管-(A測定管-A 對照管)-0.0072]÷0.6797×V 標÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T =
2.94×（A 空白管-A 測定管+A 對照管-0.0072）÷W
3. 按照細胞數量計算
酶活單位定義：每 10?個細胞每小時還原 1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。NiR（μmol/h /10?cell）= [A 空白管-(A 測定管-A 對照管)-0.0072]÷0.6797×V 標÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）÷T = 2.94×（A 空白管-A 測定管+A 對照管-0.0072）÷ 細胞數量V 標：標準液體積，0.04mL；V 樣：體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：
反應時間，1h； Cpr：樣本蛋白含量；W：樣本質量，g
注意事項：
1. 配制好的工作液 3 天內使用完。
2. 若吸光值超過 1.5，將上清液進行適當的稀釋后再加入工作液顯色，并在計算公式中乘以稀釋倍數。
3. 嚴格控制顯色時間，否則會對結果有影響。
4. 標準曲線線性范圍為 0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5. A 空白管-（A 測定管-A 對照管）線性范圍為 0.02-1.5。
上海紀寧生物科技有限公司自成立以來，一向以“優異亞硝酸還原酶(NiR)測試盒的產品，優惠的報價和交心的服務”得到廣闊新老客戶的必定和支撐，不斷提高自身的專業技術水平和服務質量，為您提供非常好的產品。
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