紀寧生物為您介紹堿性蛋白酶(AKP)測試盒測定意義
注 意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
AKP 是指在堿性條件下催化蛋白質肽鍵水解的酶類，屬于絲氨酸蛋白酶。此外，該酶還能夠水解酯鍵、酰
胺鍵，具有轉酯及轉肽的功能。該酶是主要工業用酶之一，廣泛應用于制藥、絲綢、食品、制革等行業。
測定原理：
在堿性條件下，AKP 水解酪蛋白生成酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸生成鎢藍；鎢藍在 680nm
有特征吸收峰，測定 680nm 吸光度增加速率，來計算 AKP 活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、0.5 mL EP 管和
蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 5mL 蒸餾水溶解。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 10mL 試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一
層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發，一般加熱 15-30 分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出
現顆粒物不溶物不影響使用）。
試劑四：粉劑×1 瓶， 4℃保存。臨用前加 20mL 蒸餾水溶解。
試劑五：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
標準品：液體 1mL×1 支，0.25μmol/mL 標準酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試
劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培養液：直接測定。
3. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞
加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后
8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長到 680 nm，蒸餾水調零。
2.試劑二、試劑三和試劑四置于 40℃水浴保溫 30min。
3. 對照管：取 0.5 mL EP 管，加入 20 μL 粗酶液，40 μL 試劑二，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min；加入 40μL
試劑三，混勻后 8000g ，4℃離心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 試劑四，40μL
試劑五，混勻后置于 40℃水浴保溫 20min，吸取 200μL 于 680nm 測定光吸收，記為 A 對照管。
4. 測定管：取 0.5 mL EP 管，加入 20μL 粗酶液，40μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min；加入 40μL
試劑二，混勻后 8000g，4℃離心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 試劑四，40μL
試劑五，混勻后置于 40℃水浴保溫 20min，吸取 200μL 于 680nm 測定光吸收，記為 A 測定管。（注意與空
白管不同，先加試劑三，后加試劑二）
5. 空白管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 蒸餾水，200μL 試劑四，40μL 試劑五，混勻后置于 40℃水浴保溫
20min，吸取 200μL 于 680nm 測定光吸收，記為 A 空白管。
6. 標準管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 標準品，200μL 試劑四，40μL 試劑五，混勻后置于 40℃水浴保溫
20min，吸取 200μL 于 680nm 測定光吸收，記為 A 標準管。
上海紀寧生物生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供堿性蛋白酶(AKP)測試盒科研試劑和完善的技術服務，滿足生物化學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。
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