一、直接ELISA

原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結合的抗原及雜質。加酶標抗體進行孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。加底物反應。直接法主要用于測定抗原。

優點：操作流程簡短，實驗步驟少；無需使用二抗，避免了交叉反應；實驗步驟少，操作不易出錯。

缺點：實驗中的一抗需要直接用酶標記，成本相對較高。

二、間接法ELISA

原理：將抗原與固相載體相連結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。加入特異性一抗與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，加酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，加底物顯色。

優點：酶標二抗可加強信號，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標二抗可應用于多種不同的一抗；不直標一抗，可保留更多的免疫反應性；成本更低，使用標記抗體更少。

缺點：交叉反應幾率升高。

三、雙抗夾心法ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。加酶標抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。加底物反應。

雙抗原夾心法測抗體的反應模式與測抗原相似，用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。

優點：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的；適用于復雜樣品，抗原不需要進行純化即可用于檢測；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。

缺點：檢測物需要擁有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復表位；不適用于檢測小分子物質。

四、競爭法ELISA

原理：競爭法ELISA更為復雜，通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有限量抗體，當樣品中的游離抗原越多，就可結合越多的抗體，而固相抗原只能結合較少的抗體。反之亦然。經洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結合物，只留下固相抗原與抗體的結合物。顯示經計算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據實驗設置直接法、間接法或夾心法形式。