一、細胞基本信息

細胞名稱

兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規(guī)格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

種屬來源

兔

組織來源

視網(wǎng)膜

生長特性

貼壁生長

細胞形態(tài)

視網(wǎng)膜

細胞簡介

兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上，而視錐細胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細胞，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系，負責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力強。視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）位于脈絡(luò)膜和光感受器細胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道；主要是由單層色素上皮細胞所構(gòu)成，排列十分規(guī)則。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性。細胞呈多角形，細胞分為三部分，即頂部、體部和基底部。視網(wǎng)膜色素上皮細胞無再生能力，細胞死亡后不被替換，而是鄰近的細胞向側(cè)面滑動，以填補死亡細胞遺留下來的空間。視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性。

質(zhì)量檢測

細胞角蛋白-8(CK-8)免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等

培養(yǎng)基

兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率

每2-3天換液一次

消化液

0.25%胰蛋白酶

細胞貨期

5-6周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

二、細胞培養(yǎng)操作

收貨處理

取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)

可傳2-3代，建議收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

消化方法

1. 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；

3. 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4. 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。

三、注意事項

重要提醒

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

到貨須知

1. 收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

3. 由于運輸?shù)脑颍糠旨毎捎跍囟茸兓皠×遗鲎菜劳銎扑樾纬伤槠钦，F(xiàn)象。個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

四、售后服務(wù)

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細胞不重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術(shù)問題或?qū)嶒瀱栴}，都可以撥打我們的免費服務(wù)電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術(shù)中／實驗中的免費解答。