英文名稱 ： Glutamine (Gln)Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/48S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成 ：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
提取液一
|
液體70mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
提取液二
|
液體15mL×1瓶(自備)
|
2-8℃保存
|
|
試劑一
|
液體3mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
粉劑×2瓶
|
-20℃保存
|
|
試劑三
|
液體10mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑四
|
粉劑×1瓶
|
-20℃保存
|
|
試劑五
|
粉劑×1瓶
|
-20℃保存
|
|
試劑六
|
液體8mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品
|
液體1mL×1支
|
2-8℃保存
|
產(chǎn)品說明 ：
谷氨酰胺(Glutamine)簡稱Gln，是谷氨酸的酰胺，是組成蛋白質(zhì)的重要氨基酸之一，同時谷氨酰胺也是三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸的主要來源。谷氨酰胺在生物體內(nèi)以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)兩種狀態(tài)存在，游離的谷氨酰胺是在生物體代謝中起著重要作用，其代謝占細胞和血液循環(huán)中自由氨基酸的60%以上。
游離谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼幔劝彼崦摎涿?GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，在1-mPMS作用下，WST可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，其在450nm處有吸收峰，據(jù)此可計算谷氨酰胺含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、氯仿、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
注意事項 ：
1、如果需要測蛋白濃度，需在加提取液二之前測定蛋白濃度。
2、如果離心后待測的上清依然渾濁，可嘗試加大離心轉(zhuǎn)速或者延長時間，例如12000g4℃離心5min。
3、ΔA測定的測定范圍在0.005-0.7之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定，如果測定吸光值小于線性范圍吸光值，需要增加樣本量后再次測定，注意同步計算公式。
實驗實例 ：
1.取0.1468g草莓，將樣本進行前處理，用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測定吸光度并計算A測定=0.535，A對照=0.1，?A測定=0.435，A標(biāo)準(zhǔn)=0.547，A空白=0.067，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.48。按樣本質(zhì)量計算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/g質(zhì)量)=ΔA測定×0.4÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2=4.939μmol/g質(zhì)量。
2.取0.12g兔肌肉，將樣本進行前處理，用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測定吸光度并計算A測定=0.351，A對照=0.136，?A測定=0.215，A標(biāo)準(zhǔn)=0.547，A空白=0.067，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.48。按樣本質(zhì)量計算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/g質(zhì)量)=ΔA測定×0.4÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2=2.986μmol/g質(zhì)量。
3. 取0.5mL羊血清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測定吸光度并計算A測定=0.402，A對照=0.253，?A測定=0.149，A標(biāo)準(zhǔn)=0.547，A空白=0.067，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.48。按液體體積計算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/mL)=ΔA測定×0.4÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.124μmol/mL。
