英文名稱 ： CoenzymeⅡ NADP(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/48S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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酸性提取液
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液體25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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堿性提取液
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液體25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體10 mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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試劑三
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液體4mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四 A
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粉劑×1支
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-20℃保存
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試劑四 B
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液體10mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑五
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液體25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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NADP標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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NADPH標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說明：
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和 NADPH含量測定可以計算 NADP (NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。 NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NADP+和NADPH。在1-mPMS作用下，WST- 1可與NADPH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰， 而NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH，進(jìn)一步采用WST- 1檢測。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽/勻漿器、超聲破碎儀， 可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿 /96孔板、冰和蒸餾水。
注意事項：
1 、如果一次性測定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三按比例配成混合液。
2 、反應(yīng)過程中注意避光。
3 、由于每一個測定管需要設(shè)一個對照管，本試劑盒100管可以測定48個NADP+或 NADPH。
4 、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。同步修改計算公式。
實驗實例：
1. NADP+的測定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，96孔板測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.075-0.069=0.006，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y1=0.2081x-0.0144,根據(jù)標(biāo)曲得出 x1=0.098，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/g質(zhì)量)= x1÷W=0.98 nmol/g質(zhì)量。
NADPH的測定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，96 孔板測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.155-0.110=0.045，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y2=0.0478x-0.0188,根據(jù)標(biāo)曲得出x2=1.335 ，NADPH含量得： NADPH (nmol/g質(zhì)量) = x2÷W=13.35 nmol/g 質(zhì)量。
2. NADP+的測定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，96孔板測得吸光值后計算ΔA測
定=A 測定-A 對照=0.194-0.146=0.048，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y1=0.2081x-0.0144,根據(jù)標(biāo)曲得出 x1=0.3 ，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/g 質(zhì)量)= x1÷W=2.999nmol/g質(zhì)量。
NADPH 的測定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，96孔板測得吸光值后計算ΔA
測定=A 測定-A 對照=0.170-0.141=0.029，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y2=0.0478x-0.0188,根據(jù)標(biāo)曲得出 x2=1 ，NADPH 含量得：NADPH (nmol/g質(zhì)量) = x2÷W=10 nmol/g質(zhì)量。
3. NADP+ 的測定：取0.1mL牛血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，96孔板測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.077-0.067=0.010，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y1=0.2081x-0.0144,根據(jù)標(biāo)曲得出 x1=0.117 ，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/mL)= 11×x1=1.29nmol/mL。
NADPH的測定：取0.1mL牛血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，96孔板測得吸光值后計算ΔA 測
定=A測定-A對照=0.084-0.072=0.012，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=0.0478x-0.0188,根據(jù)標(biāo)曲得出 x2=0.644，NADPH含量得：NADPH (nmol/mL)= 11×x2=7.088nmol/mL。
