英文名稱 ： Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/24S
儲存條件 ： 2-8℃
檢測方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
提取液一
|
液體 25 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
提取液二
|
液體 25mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑一
|
液體60mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
液體20mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑三
|
液體15mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑四
|
液體3mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
粉劑一
|
粉劑×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品
|
粉劑×1 支
|
2-8℃保存
|
產(chǎn)品說明：
蛋白質(zhì)是一類重要的生物大分子，存在于一切生物體內(nèi)， 是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)。二硫鍵是連接不同肽鏈或同一 肽鏈中，兩個不同半胱氨酸殘基的巰基的化學(xué)鍵。二硫鍵對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)影響很大，在蛋白質(zhì)分子中，起著穩(wěn)定 肽鏈空間結(jié)構(gòu)的作用，所以測定蛋白質(zhì)二硫鍵含量尤為重要。
還原劑會使二硫鍵裂解,裂解后的巰基會發(fā)生親核反應(yīng)， 即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng),生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰，據(jù)此可以計算蛋白質(zhì)二硫鍵含量。
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、低溫離心機、 研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、丙酮（AR）、蒸餾水。
注意事項：
若樣本ΔA測定<0.01,可適當(dāng)增大樣本量后測定，注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計算公式；若樣本ΔA測 定>1.5,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
實驗實例：
1、取 100μL馬血清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=（A2 測定-A1 測定）-(A2 對照-A1對照)=（0.557-0.110)-(0.038-0.021)=0.430 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.633-0.076=0.557，按樣本液體體 積計算蛋白質(zhì)二硫鍵含量得：
蛋白質(zhì)二硫鍵含量(μmol/mL）=1.25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F =0.965μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1 測定）-（A2對照-A1 對照）=（0.727-0.111）-（0.339-0.095）=0.372 ，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計 算蛋白質(zhì)二硫鍵含量得：
蛋白質(zhì)二硫鍵含量(μmol/g 質(zhì)量）=0.125×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=0.806μmol/g 質(zhì)量。
3、取 0.1078g 黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋 2 倍后， 按照測定步驟操作，用 1mL 玻璃比色皿測得 ΔA 測定=
（A2 測定-A1 測定）-（A2 對照-A1 對照）=（1.080-0.068）-（0.108-0.033）=0.937 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)二硫鍵含量得：
蛋白質(zhì)二硫鍵含量(μmol/g質(zhì)量)= 0.125×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =3.901μmol/g質(zhì)量。
