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豌豆耳狀突起花葉病毒RT-PCR試劑盒

品牌：紀寧生物

貨號：JN28762

規(guī)格： 50次

聯系方式：021-54721350

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產品詳情

豌豆耳狀突起花葉病毒RT-PCR試劑盒
產品及特點：
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據豌豆耳狀突起花葉病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	豌豆耳狀突起花葉病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	豌豆耳狀突起花葉病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

注：為避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供專一的DNA 片段作為陽性對照。
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 豌豆耳狀突起花葉病毒 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT-PCR反應(20μL體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	RT-PCR 陰性對照	RT-PCR 陽性對照
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
豌豆耳狀突起花葉病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	各 12.5μL	--	--
超純水	--	12.5μL	--
豌豆耳狀突起花葉病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:

過程	溫度	時間
逆轉錄	42℃	30 min
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35個循環(huán)	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。

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豌豆耳狀突起花葉病毒RT-PCR試劑盒

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