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基本信息
產品名稱 ： 鴨胚成纖維細胞
產品品牌 ： 紀寧生物
組織來源 ： 胚胎組織
產品規格 ： 5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
鴨胚成纖維細胞分離自胚胎。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化。
成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起。6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團。細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞常用作ES細胞培養常用的飼養層細胞，能產生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子，故能有效地促進ES細胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優于外源添加的一些因子，而且可以為ES細胞的培養提供類似于體內的微環境，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用。
方法簡介
紀寧生物實驗室分離的鴨胚成纖維細胞采用胰蛋白酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
紀寧生物實驗室分離的鴨胚成纖維細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 ： 含FBS、bFG F、Insulin、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態 ： 成纖維細胞樣
傳代特性 ： 可傳3-5代左右。3代以內狀態最佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 ： 氣相 ： 空氣，95% 。C O2，5%
鴨胚成纖維細胞體外培養周期有限。建議使用紀寧生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
鴨胚成纖維細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在紀寧生物技術部標準操作流程下，細胞可傳3-5代左右。3代以內狀態最佳。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1）吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS（37℃預熱）清洗細胞一次。
2）添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，37℃溫浴1min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3）用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4）待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按換液頻率更換新鮮的完全培養基（37℃預熱）。
3. 復蘇操作說明
1. 準備好37度水浴鍋，預熱至37度。
2. 準備好T25培養瓶，加入10ml完全培養基（培養基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內凍存細胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內進水導致污染），迅速放于水浴鍋內，于1min內融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內。
5. 吸取凍存管內細胞懸液，加入步驟2中準備好的T25培養瓶內，8字緩慢搖勻。
6. 培養瓶放于37度C O 2恒溫培養箱內，靜置培養24h，更換新鮮換培養基（注意貼壁細胞、懸浮細胞不同換液操作方法）。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和紀寧生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
