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9002-07-7 / 胰蛋白酶分離純化方法

背景及概述[1][2]

胰蛋白酶(Trypsin)系從哺乳類動物胰臟制得的蛋白質水解酶。結晶胰蛋白酶系從牛胰臟提取物中結晶而得,為白至黃色結晶或無定形粉末。臨床用于液化血塊和積膿,消化纖維沉積和壞死組織、凈化創面,有利于新生肉芽的生長,促進愈合。氣霧給藥能液化粘痰。血清中含有非特異性的胰蛋白酶抑制劑,故不損傷正常組織。本品能增加大分子對組織的滲透性,故與抗生素或磺胺類藥物合用治療各種炎癥、膿腫、潰瘍、纖維素粘連等效果更顯著。

胰蛋白酶分離純化方法

分離純化方法[4]

將胰蛋白酶粗品溶解后,經鹽溶、鹽析,再用活性胰蛋白酶激活,被激活的酶溶液再經結晶透析、凍干的方法,即可得較高純度的胰蛋白酶,包括如下步驟:

(1)投料:稱取胰蛋白酶粗品,按每克胰蛋白酶粗品加2~4ml的水攪拌溶解,調節pH至3.0±0.5,以助其溶解,攪拌10~16小時;計量溶液體積,按400~500g/L比例加入固體硫酸銨,待其溶解后,靜置沉淀10~16小時;

(2)鹽溶:將溶液過濾,稱量濾餅重量,先按每克濾餅加入2~4ml的水,攪拌溶解后,調節pH至3.0±0.4,再按每克濾餅加入1~3ml的飽和硫酸銨溶液靜止沉淀10~16小時;

(3)鹽析:將溶液過濾,量取濾液體積,加入等體積量的飽和硫酸銨溶液,靜置沉淀10~16小時;

(4)洗鎂:將上清液棄去,沉淀物真空抽濾,并在濾餅上加入飽和硫酸鎂溶液,靜置1分鐘,抽濾,待濾液開始流出,將漏斗上剩余的硫酸鎂溶液傾去,將濾餅取出稱重,待活化;

(5)活化:稱濾餅重量為A千克,將濾餅溶于3A~5A升的0.001~0.01mol/L鹽酸溶液,另加入0.5~2mol/L氯化鈣溶液A~3A升及pH7.5~8.5硼酸緩沖液4A~6A升,再加入6A~9A升的水,調節pH至7.0~8.0,最后每克濾餅加5~15mg的結晶胰蛋白酶進行活化,將溶液置0~10℃中靜置60~80小時進行活化,pH控制在7.0~8.0;

(6)除鈣:活化后的溶液,調節pH至3.0±0.4,再按200~300g/L加入固體硫酸銨,攪拌溶解,在0~10℃中存放32~60小時使硫酸鈣沉淀,過濾,濾液按150~250g/L加入固體硫酸銨,在0~10℃中靜置10~14小時,過濾,得濾餅;

(7)結晶:按每克濾餅加入1~2mlpH8.0~10.0硼酸緩沖液,調節pH至8.0±0.4,攪拌均勻,再將溶液裝透析袋,0~10℃時浸于外透液中,結晶3~7天;

(8)透析:取出結晶液過濾得結晶物,再按每克結晶物加入1~3ml水溶解,調節pH至3.0±0.5;將溶液透析2~4天,去除雜質,每10~14小時左右透析池換水一次,溫度控制在0~10℃;

(9)凍干:取出透析液,加入少量硅藻土,抽濾,得濾液,調節pH至6.0±0.4,進凍干機凍干后得結晶胰蛋白酶成品。

臨床應用[3]

為蛋白分解 酶,能分解、液化血凝塊、膿、 壞死組織及炎性滲出物等,并能促進新生肉芽的生長。用于膿胸、外科炎癥、潰瘍、創傷性損傷等產生的局部水腫、血腫、膿腫等,也可用于虹膜睫狀體炎、視網膜炎。噴霧吸入,可治療呼吸道疾病,與抗生素或磺胺類藥物合用,療效更為顯著。近年發現可用來治療毒蛇咬傷,蛇毒的毒性成分為一種蛋 白質,故本品能將其分解破壞。

主要參考資料

[1] 現代藥學名詞手冊

[2] 中國醫學百科全書·十八 藥物學與藥理學

[3] 實用藥物手冊

[4] CN201510820580.3 一種分離純化胰蛋白酶的方法及提高胰蛋白酶復溶性的藥物組合物

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