68988-92-1/瑞氏色素的使用說明

背景及概述^[1][2]

瑞氏色素是酸性染料伊紅(Eosin)和堿性染料亞甲藍(Methylene Blue)組成的復(fù)合染料,對原生質(zhì)的染色有很好的區(qū)別作用。各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料結(jié)合后，染紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合，染淡紫紅色，稱為嗜中性物質(zhì)。

原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞胞質(zhì)、核仁含較多酸性物質(zhì)，染成較濃厚的藍色；中幼紅細(xì)胞既含酸性物質(zhì)，又含堿性物質(zhì)，染成紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細(xì)胞，酸性物質(zhì)徹底消失后，染成粉紅色。瑞氏染液為藍色澄明液體，有甲醇特異香味，主要由美藍、伊紅、甲醇等組成，其中甲醇的作用是溶解美藍和伊紅以及固定細(xì)胞形態(tài)。

瑞氏色素，直接使用，無需任何配制過程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇揮發(fā)或氧化，同時也可使血細(xì)胞染色較清晰。經(jīng)常用于血液和細(xì)胞涂片、骨髓細(xì)胞涂片、細(xì)菌染色。細(xì)胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核及細(xì)菌呈藍色，嗜酸性顆粒呈橘紅色。

理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)^[1]

瑞氏色素密度0.8，熔點-98 ºC，沸點65 ºC，折射率1.52-1.522，閃點11 ºC，瑞氏色素是一種復(fù)合的中性染色劑，由曙紅和一種氧化的并除去部分甲基的亞甲藍組成的化合物。它對于原生質(zhì)的染色，具有分別嗜中性、嗜堿性和嗜酸性部分 的作用。特別使用于血液的染色。溶于乙醇，不溶于水。最大吸收波長640(522)nm。

PH對細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均不蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅；在偏三性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍或天青結(jié)合，染色偏藍。因此細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經(jīng)片必須清潔，無酸堿污染。醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理配制頊特液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。

瑞氏色素

使用方法^[3]

1、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片或細(xì)菌涂片，待涂片自然干燥。

2、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3、滴加適量瑞氏色素覆蓋涂片，室溫染色 1～2min。

4、涂片滴加等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動玻片或采用其他方式混合，使磷酸鹽緩沖液與瑞氏色素混勻，室溫靜置 3～10min。

5、用自來水或蒸餾水從玻片一端輕輕沖洗。(注:也可先用磷酸鹽緩沖液沖洗玻片，時間控制在 30s左右。)

6、干燥。

7、鏡檢:先用低倍鏡觀察血涂片，再用油鏡。

應(yīng)用^[3]

顯微鏡涂片用染色劑，如血、骨髓的染色，血液中寄生蟲染色(原蟲、利什曼原蟲、血絲蟲等)。生物染色。顯微鏡涂片用染色劑，如血、骨髓的染色、血液中寄生蟲染色(原蟲、利什曼原蟲、血絲蟲等)。

注意事項^[2]

1、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻，以免影響染色效果。

2、涂片染色中，請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗。不能先倒掉染液，以免染料沉著于涂片上。

3、染色液可重復(fù)使用，但不能多次重復(fù)，若有沉淀物應(yīng)過濾后使用。

4、染色過深可用甲醇或酒精適當(dāng)脫色，最好不復(fù)染。

5、如果染色過深或過淺，應(yīng)調(diào)整染色時間或工作液濃度。

6、pH 值對染色有一定影響，載玻片應(yīng)清潔、無酸堿污染，以免影響染色效果。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

8、瑞氏染液用前應(yīng)充分搖勻，保證染色的均一性；染色液用量應(yīng)充足，勿使染色液蒸發(fā)干。

9、瑞氏染液僅用于體外診斷，應(yīng)由專業(yè)人士使用及進行結(jié)果的判讀。

10、使用前應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書，并做好個人衛(wèi)生防護，在有效期內(nèi)使用，生產(chǎn)日期、生產(chǎn)批號和失效日期見包裝。

11、用后應(yīng)按醫(yī)院或環(huán)保部門要求處置廢棄物。

主要參考資料

[1]張保. (1991). 糾正質(zhì)量差的瑞氏色素的簡便方法. 檢驗醫(yī)學(xué), 6(3), 185-185.

[2] 劉志蘭, & 趙寶忠. (2009). 瑞氏染液混配機的設(shè)計. 生物醫(yī)學(xué)工程與臨床, 13(1), 67-70.

[3] 幸建英, 童華波, 汪彥嶼, & 呂純莉. (2009). 瑞氏染色含紫黑色顆粒細(xì)胞鐵染色57例臨床觀察. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報, 31(13), 1324-1325.