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草酸可降低礦質元素的生物利用率，容易與鈣離子形成草酸鈣，所以草酸往往被認為是一種礦質元素吸收利用的拮抗物。草酸根有很強的配合作用，草酸能與許多金屬形成溶于水的絡合物。草酸是有機酸中的強酸，具有很強的還原性、不穩定性、可以跟醇反應生成酯。比如乙二酸跟乙醇反應生成乙二酸二乙酯。草酸對皮膚、粘膜有刺激及腐蝕作用。
分析中用以檢定和測定鈹、鈣、鉻、金、錳、鍶、釷等金屬離子。顯微微晶分析檢驗鈉和其他元素。校準高錳酸鉀和硫酸鈰溶液的標準溶液。建筑行業在涂刷外墻涂料前、由于墻面堿性較強應先涂刷草酸除堿。
催化反應溫和，過程比較平穩，持續時間最長。草酸丙酮溶液能催化環氧樹脂固化反應，縮短固化時間。也用作合成脲醛樹脂、三聚氰胺甲醛樹脂的pH值調節劑。還可加入聚乙烯醇縮甲醛水溶性膠黏劑中提高干燥速度和粘接強度。可用作KMnO4氧化劑制備淀粉膠黏劑的促進劑，加快氧化速度，縮短反應時間。
用于提煉稀有金屬稀土元素的溶劑、染料還原劑、鞣革劑等。印染工業可代替乙酸，用作色素染料的顯色助染劑、漂白劑。草酸還可用于鈷-鉬-鋁催化劑的生產、金屬和大理石的清洗及紡織品的漂白、皮革加工、催化劑制備等。
在有機合成工業主要用于生產對苯二酚、季戊四醇、草酸鈷、草酸鎳、沒食子酸等化工產品。塑料工業用于生產聚氯乙烯、氨基塑料、脲醛塑料、漆片等。染料工業用于制造鹽基品綠等。此外，草酸還可用于合成各種草酸酯、草酸鹽和草酰胺等產品，而以草酸二乙酯及草酸鈉、草酸鈣等產量最大。
草酸銻可作媒染劑，草酸鐵銨是印制藍圖的藥劑。
草酸可用來除銹。不過使用時要小心，草酸對不銹鋼有較強的腐蝕性。濃度高的草酸也容易腐蝕手，皮膚接觸草酸后，應及時用水清洗。
密封于干燥陰涼處保存。嚴格防潮、防水、防曬。貯存溫度應不超過40℃。遠離氧化物及堿性物質。用聚丙烯編織袋內襯塑料袋包裝。