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2591-17-5 / D-熒光素的作用機制

1.D-熒光素(D-luciferin )適合用于哪些實驗?

作為螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase )的作用底物,常常用于以下實驗,

1)體內活體成像In vivo imaging ;熒光素酶標記的腫瘤細胞、干細胞或傳染疾病通常注射入研究動物模型比如大小鼠內進行研究,從而對動物模型進行實時和非侵略性的監測疾病進程和/或藥效。

2)體外研究In vitro study,包括熒光素酶和ATP水平分析﹔報告基因分析﹔高通量測序和各種污染檢測。

2.作用機制

作用機制:在ATP和熒光素酶的作用下,D-熒光素(底物)被氧化發光。當熒光素過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性(見下圖)。

D-熒光素的作用機制

機理闡釋(體內):熒光素酶( Luc ) 催化底物D-熒光素,利用ATP和Mg2+作為輔因子,氧氣存在下發射一典型的黃綠光,之后在體內37°C下遷移到紅光。

機理闡釋(體外)∶很多因素都可能影響反應靈敏性,包括溫度、pH或底物濃度。建議使用pH 7.8的緩沖液,并且使用前將所有試劑預熱到室溫。建議反應緩沖液內添加過量的ATP和Mg2+以達到最佳反應狀態。

3.應用

D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應用于整個生物技術領域,尤其是體內活體成像技術。

將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質粒轉染入細胞后,導入研究動物如大、小鼠體內,之后注入熒光素,通過生物發光成像技術(BLI)來檢測光強度變化,從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響,根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

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