14605-22-2/牛磺熊去氧膽酸的含量檢測和制備

背景及概述^[1]

牛磺熊去氧膽酸(tauroursodeoxycholicacid)是熊膽汁的主要有效成分，也是人工合成熊膽的主要成分，廣泛存在于人和多種動物膽汁中的一種結合型膽汁酸，有著多種生理藥理作用，該藥及其制劑在國外已有二十年的上市臨床經驗，主要用于固醇性膽囊結石、膽汁郁積性肝病(如：原發性膽汁性肝硬化)、膽汁反流性胃炎、自身免疫性肝炎(AIH)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、原發性硬化性膽管炎(PSC)、慢性肝炎(乙肝、丙肝等)、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、藥物性肝損害、肝移植術前后預防及治療并發癥等。該藥于1992年由BruschettiniS.R.L意大利貝斯迪大藥廠首次注冊上市，2007年獲準在中國銷售。

制備^[1-2]

報道一、

一種牛磺熊去氧膽酸鈉的制備方法，包括：

(1)10g熊去氧膽酸原料(25.5mmol)，2.7g三乙胺(26.5mmol)溶于丙酮100ml溶液中，冷卻至-5～-10℃，向溶液中滴加2.9g氯甲酸乙酯(25.97mmol)，滴加完畢后繼續在-5～-10℃攪拌20min，過濾除去三乙胺鹽，濾液備用；

(2)牛磺酸縮合反應

將牛磺酸4g(31.875mmol)溶于22ml1mol/L碳酸鈉溶液中，滴加到前項所得混合酸酐溶液中，在20～30℃下30min內均速添加完畢，快速攪拌3h-4h，濾除沉淀，濾液備用；

(3)調酸與濃縮干燥

上述濾液用2mol/LHCL溶液調pH6-7，回收蒸干溶液，80℃下繼續減壓抽干，得牛磺熊去氧膽酸干燥物；所述的減壓抽干可以選取的溫度范圍為70℃～90℃，本方法中選取80℃；

報道二、

高純度的牛磺熊去氧膽酸的制備

a)牛磺熊去氧膽酸粗品的制備，按以下步驟進行：

在反應釜中，加入4.0KG熊去氧膽酸，加入19KG丙酮，攪拌下加入三乙胺1650ml，開啟夾套制冷，將混合液的溫度降至-10℃。流加氯甲酸乙酯1120ml，控制氯甲酸乙酯的加入速度，使得反應液溫度維持在-5-0℃之間，30分鐘時加完，繼續維持溫度攪拌反應40分鐘，制得熊去氧膽酸與氯甲酸乙酯的混合酸酐，將上述混合酸酐反應液通過過濾器用氮氣壓濾至裝有4.2KG純化水，1.4KG牛磺酸，0.4KG氫氧化鈉的50升反應釜中，充分攪拌反應3小時，進一步制得牛磺熊去氧膽酸粗品4.0KG。

b)牛磺熊去氧膽酸粗品的精制，按以下步驟進行：

(1)將4.0KG牛磺熊去氧膽酸投入50L反應釜中，加入4KG水和580ml丙酮，，加熱攪拌至全部溶解；

(2)攪拌下冷卻至-5-0℃，析晶30小時；

(3)放料至過濾器中抽濾，抽干后用冰水(-3-0℃)淋洗濾餅，再次抽干，得牛磺熊去氧膽酸3.3KG(純度99.6％，HPLC)，其中牛磺鵝去氧膽酸的含量為0.3％，其他最大單雜含量0.05％(液相色譜測定)

含量檢測^[3]

一種新的牛磺熊去氧膽酸含量以及有關物質的檢測方法，所述有關物質為牛磺鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸，其特征在于包括以下步驟：

A、取牛磺熊去氧膽酸-sigma對照品為已知對照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.5mg/ml的對照品溶液，取牛磺熊去氧膽酸樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.5ml/ml的對照品供試品溶液；

B、分別取20ul注入液相色譜儀中，記錄色譜圖中牛磺熊去氧膽酸的峰面積，按照外標法，以無水牛磺熊去氧膽酸來計算HPLC含量，不小于99％；

C、取中檢所對照品牛磺鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸，再用流動相溶解成濃度為5ug/ml的雜質對照品溶液，取牛磺熊去氧膽酸樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.5mg/ml的樣品溶液；

D、分別取20ul注入液相色譜儀中，記錄色譜圖中牛磺鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸的峰面積，再按照外標法計算牛磺熊去氧膽酸樣品中有關物質的大小，牛磺鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸不超過1.0％和0.5％。

參考文獻

[1][中國發明,中國發明授權]CN201210162693.5牛磺熊去氧膽酸鈉的制備方法

[2][中國發明,中國發明授權]CN201010552339.4一種高純度牛磺熊去氧膽酸及其制備方法

[3][中國發明,中國發明授權]CN201610192203.4一種新的牛磺熊去氧膽酸含量以及有關物質的檢測方法