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靈芝含有豐富的活性成分，以多糖和屬三萜類的靈芝酸為主要活性成分。藥理研究顯示靈芝多糖具有抗癌、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗氧化等作用；靈芝酸C2可抑制腫瘤細(xì)胞、艾滋病毒以及細(xì)菌。當(dāng)前靈芝多糖等靈芝活性物質(zhì)生產(chǎn)主要依賴人工栽培子實(shí)體為原料以提取的方法獲取，具有產(chǎn)率低、難以規(guī)?；a(chǎn)以及不同批次間活性成分組成及含量有較大差異等缺點(diǎn)。
靈芝酸C2是一類高度氧化的羊毛甾烷衍生物，主要有高效液相色譜法、香草醛-高氯酸比色法和紫外吸收法等3種分析方法。高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)在于其可同時(shí)分析不同單體靈芝酸含量以及樣品制備過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，但儀器昂貴、不易操作以及試劑要求高；紫外吸收法和香草醛-高氯酸比色法由于所需儀器設(shè)備簡(jiǎn)單成為靈芝酸分析的主要方法。紫外吸收法通常以靈芝酸A和百里酚為靈芝酸對(duì)照品以定量分析；香草醛-高氯酸比色法主要以熊果酸和齊墩果酸作為參比物進(jìn)行分析。但是利用紫外可見(jiàn)光譜分析不同靈芝酸及對(duì)照品差異，以不同對(duì)照品利用紫外吸收法和香草醛-高氯酸比色法分析靈芝發(fā)酵菌絲及子實(shí)體靈芝酸含量，是沒(méi)有的。
靈芝酸C2
（1）稱取靈芝浸膏副產(chǎn)物原料，加一定量的無(wú)水乙醇，比例為1:5，超聲溶解，溶液離心后取上清液過(guò)0.45μm濾膜，得靈芝原液，供中壓制備用；
（2）Flash中壓制備收集到的液體上HPLC測(cè)定，分別得到靈芝酸A、B、C2混合物，水浴蒸干，供高壓制備備用；
（3）靈芝酸A、B、C2混合物蒸干后，加入適量甲醇溶解，過(guò)膜，濾液進(jìn)行高壓制備純化，Prep高壓制備收集到的液體上HPLC測(cè)定，分別得到靈芝酸單體，再進(jìn)行重結(jié)晶，得到靈芝酸純品。
以下以具體實(shí)驗(yàn)為例進(jìn)行說(shuō)明：
（1）樣品前處理取20g靈芝浸膏副產(chǎn)物研磨，加100mL無(wú)水乙醇（或甲醇），超聲1h，溶液于7800r·min-1，離心10min。取上清液過(guò)0.45μm濾膜，得棕褐色副產(chǎn)物溶解液，備用。
（2）中壓制備靈芝酸粗提物Flash中壓制備色譜條件：Grace色譜柱C18-WP（40g，20μm）；以乙腈-0.05%醋酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；Flash模式下色譜條件：流速25mL/min，運(yùn)行時(shí)間10min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，進(jìn)樣約1.2mL；梯度洗脫程序：乙腈-0.05%醋酸溶液：0～4min：45%乙腈；4～4.01min：45%~55%乙腈；4.01～10min，55%乙腈。收集到的液體上HPLC測(cè)定，分別得到靈芝酸A、B、C2混合物，水浴蒸干備用。
（3）高壓制備靈芝酸提物靈芝酸A、B、C2混合物蒸干后，加入適量甲醇溶解，過(guò)0.45μm濾膜，濾液進(jìn)行高壓制備純化。Prep高壓制備色譜條件：Waters制備色譜柱（SunFireTMPrepC18OBDTM5μm19*150mm）；以乙腈-0.05%醋酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；Prep模式下色譜條件：流速13mL/min，運(yùn)行時(shí)間43min，平衡時(shí)間3min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，進(jìn)樣約1mL；梯度洗脫程序：乙腈-0.05%醋酸溶液：0～29min：30%乙腈；29～36min：30%～50%乙腈；36～36.1min，50%～90%乙腈；36.1～43min，90%乙腈。收集到的液體上HPLC測(cè)定，分別得到靈芝酸A、靈芝酸B和靈芝酸C2，水浴蒸干。重結(jié)晶提純后，經(jīng)高效液相色譜鑒定，靈芝酸A、靈芝酸B和靈芝酸C2純度均大于98%。
[1]董虹玲, 夏廣萍, 趙娜夏, 白秀秀, 邵澤艷, & 韓英梅. (2013). Hplc法測(cè)定靈芝子實(shí)體和孢子粉中靈芝酸c2,靈芝酸g和靈芝酸a. 現(xiàn)代藥物與臨床, 28(1), 41-43.
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